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ELISA實驗是一種敏感性高,特異性強,重復(fù)性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀等因索,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各域中。ELISA試劑盒應(yīng)該如何保存?保存不當(dāng)會導(dǎo)致試劑失效或影響實驗結(jié)果!
1、要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅索基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。
2、樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
3、血清標(biāo)本如是以無菌操作分離,則可以在2~8下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應(yīng)在-70℃以下。
4、冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。
5、ELISA試劑盒的標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時,應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。