人ELISA試劑盒操作步驟

人ELISA試劑盒操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在一、 二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100ul，然后在一、二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻; 然后從一孔、二孔中各取100ul分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50ul棄掉，再各取50ul分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50ul分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50u，混勻后從第七、第八孔中分別取50ul加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μ，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為240pg/ml，160pg/ml，80pg/ml，40pg/ml，20pg/ml)。

2. 加樣: 分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40ul，然后再加待測(cè)樣品10ul(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育: 用封板膜封板后置37°℃溫育30分鐘。

4. 配液: 將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

5. 洗滌: 小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶: 每孔加入酶標(biāo)試劑50ul，空白孔除外。

7. 溫育: 操作同3。

8. 洗滌: 操作同5。

9. 顯色: 每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50ul，輕輕震蕩混勻，37°C避光顯色15分鐘.以內(nèi)進(jìn)行。

10. 終止: 每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測(cè)定: 以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘。

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