ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)誤差注意事項(xiàng)

ELISA試劑盒可以簡單、地從瓊脂糖凝膠上純化回收DNA段，同時(shí)除去蛋白質(zhì)、其它有機(jī)化合物、無機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)?？苫厥?00bp–40 kb DNA段，可純化高達(dá)10μg的DNA段，回收率可達(dá)80%以上（<100bp或>10kb的DNA段回收率為30–50%）。使用ELISA試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉(zhuǎn)化等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
ELISA試劑盒注意事項(xiàng)：
1、 不同廠家生產(chǎn)的試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同，務(wù)必按照所用試劑盒嚴(yán)格操作，否則容易產(chǎn)生檢測結(jié)果的不確定性.
2、 若不同批號試劑的不同組分（A液或酶工作液），或不同試劑的不同組分進(jìn)行交叉使用，有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高，花板等情形。
3、 加樣時(shí)樣品量誤差，對于陰或很陽的標(biāo)本影響不大，但對閾值附近的標(biāo)本影響很大，建議校對加樣器。
4、 反應(yīng)時(shí)間的誤差，做大量標(biāo)本時(shí)，*孔和zui后一孔以及一些特殊標(biāo)本可能影響較大。
5、 由于滴瓶的精密性肯定不如加樣器，不排除不同滴頭滴量的誤差。另外滴加過程中是否產(chǎn)生氣泡、速度是否均勻，是否顫動(dòng)等影響液量的因素均可導(dǎo)致以上情況。高標(biāo)準(zhǔn)要求時(shí)應(yīng)使用加樣器。
6、 閾值附近實(shí)際上是個(gè)灰區(qū)（gray scale）,不能截然分為陰性、陽性，國外廠家均要求對這部分可疑標(biāo)本進(jìn)行奇數(shù)次復(fù)檢，以次數(shù)多者為準(zhǔn)，如一次陽兩次陰zui后判為陰，但實(shí)際上是否為陰不好說，只有判為可疑，臨床上可以讓患者過一段時(shí)間后再測。
7、 肉眼觀察稍顯色，酶標(biāo)儀打印為陰性的標(biāo)本在實(shí)際工作中是難以避免的，肉眼目測結(jié)果不可靠，應(yīng)以酶標(biāo)儀判讀為準(zhǔn)。
8、 由陰性變?yōu)閺?qiáng)陽性原因多為操作過程中漏加試劑等有關(guān)。
9、 臨界值附近標(biāo)本波動(dòng)為正?，F(xiàn)象，任何試劑均不可避免?？梢钥紤]將標(biāo)本做奇數(shù)次復(fù)檢。