流式抗體的選擇使用及注意事項(xiàng)

流式抗體的選擇：

1、流式抗體本身也是抗體，所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇基本的條件：目標(biāo)蛋白特異性，反應(yīng)種屬以及應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。

2、流式抗體熒光標(biāo)記的方式包括直接標(biāo)記和間接標(biāo)記兩種。在流式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，盡量減少實(shí)驗(yàn)工序和過(guò)程，以保證實(shí)驗(yàn)的真實(shí)和準(zhǔn)確性。因此在條件允許的范圍內(nèi)，建議盡量用直接標(biāo)記的抗體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)而不去做間接標(biāo)記。

3、流式抗體熒光標(biāo)記的選擇：如果實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)單一指標(biāo)：不同熒光標(biāo)記在不同的儀器上強(qiáng)度不同。FACS Calibur儀器為例：PE ＞APC ＞PE-Cy5 ＞PerCP ＞FITC ＞PerCP-Cy5.5，通常來(lái)說(shuō)，PE*，適用于弱表達(dá)抗原。FITC強(qiáng)度較弱，適用于強(qiáng)表達(dá)抗原，使用范圍比較廣。用戶需根據(jù)檢測(cè)的目標(biāo)蛋白進(jìn)行具體選擇。如果同時(shí)檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)：確認(rèn)流式細(xì)胞儀能檢測(cè)多少個(gè)通道：流式抗體每個(gè)通道只能選擇1種熒光素。各個(gè)通道之間的熒光素可以隨意搭配。如：實(shí)驗(yàn)者同時(shí)檢測(cè)三個(gè)指標(biāo)，可以在圖1中綠色、和紅色三個(gè)通道中各選一個(gè)適當(dāng)?shù)臒晒馑貥?biāo)記，F(xiàn)ITC、PE和PE-cy5。切忌所有指標(biāo)選擇同一個(gè)通道的熒光標(biāo)記，以防止熒光的重疊和相互干擾，影響后結(jié)果。因此，流式細(xì)胞儀的通道越多，同一份樣本能同時(shí)做的表面/胞內(nèi)標(biāo)志就越多。常用熒光標(biāo)記包括FITC, PE, PEcy5, PEcy5.5, APC等。

流式抗體的選擇使用注意事項(xiàng)：

1、建議實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的數(shù)量和抗體的比例要適當(dāng)。細(xì)胞過(guò)量或抗體過(guò)量都可能使實(shí)驗(yàn)結(jié)果受影響，因此需要優(yōu)化試驗(yàn)條件。注：不同的流式技術(shù)對(duì)抗體的需求量有較大差異，例如傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)（采用鞘液流系統(tǒng)）需要1×106個(gè)細(xì)胞為起始上樣量，抗體用量為10μl，而微流式細(xì)胞術(shù)則只需5×105個(gè)細(xì)胞，抗體用量減少到5μl。

2、 直標(biāo)的流式抗體應(yīng)該4℃避光保存，不要冷凍。